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    產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

    普氏立克次體(RP)檢測試劑盒

    簡要描述:

    普氏立克次體(RP)檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:Kif14 protein 驅(qū)動蛋白家族Member14蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
    Rabbit Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
    ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 雌激素受體相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
    SLC14A1/RAC

    更新時間:2022-02-25

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    普氏立克次體(RP)檢測試劑盒

    PCR實驗方法步驟:

    方法

    1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

    10×PCR buffer

    5 μl     dNTP mix (2mM)

    4 μl     引物1(10pM)

    2 μl     引物2(10pM)

    2 μl     Taq酶 (2U/μl)

    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

    1 μl      加ddH2O至 50 μl

    產(chǎn)品特點:

    ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;

    ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

    ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

    ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

    操作流程:

    收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

    特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    貨號

    普氏立克次體(RP)檢測試劑盒

    50T

    FS-01H4445

     


    操作流程.jpg

     

    實時熒光定量PCR:

    實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:

    1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。

    2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

    外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

    定量PCR方法:

    a、競爭法

    選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

    b、內(nèi)參照法

    在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測

    使用方法:

    一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

    1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

    2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

    3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

    4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

    5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

    6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

    二、樣品 DNA 的制備

    7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

    8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

    三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

    9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

    關(guān)附甲 規(guī)格: 50mg

    29007酰胺-對照品;有報告 規(guī)格: 250mg

    981-15-7臭椿 規(guī)格: 10mg

    68027-15-6hederagenin 3-O-α-L- 規(guī)格: HPLC≥98%;5mg/支

    1072-93-1表告依春 規(guī)格: 20mg

    4261-42-1異葒草 規(guī)格: 20mg

    545-47-1羽扇豆;Lupeol 規(guī)格: 20mg

    63-68-3L-蛋氨 規(guī)格: 20mg

    969-33-5賽庚啶 規(guī)格: 50mg

    465-99-6常春藤皂元;Hederagenin 規(guī)格: 20mg

    普氏立克次體(RP)檢測試劑盒Glypican 5  磷脂酰基聚糖-5抗體 規(guī)格: 0.2ml

    HRAS/Ras/Ras p21  原基因H-ras抗體 規(guī)格: 0.1ml

    ELOVL2  鏈脂肪延ELOVL2抗體 規(guī)格: 0.2ml

    MAL  T淋細胞成熟相關(guān)抗體 規(guī)格: 0.2ml

    DHRS9  短鏈脫/還原家族9抗體 規(guī)格: 0.2ml

    phospho-P53(Thr81)  磷化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml

    FbxO6  F-box相關(guān)6抗體 規(guī)格: 0.2ml

    CCDC70  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域70抗體 規(guī)格: 0.2mlTRIM29/ATDC  共濟失調(diào)毛細管擴張癥D相關(guān)抗體 規(guī)格: 0.2ml

    LAMP-3/DC-LAMP/CD208  溶體相關(guān)膜3抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3(Tyr1328)  磷化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

    LILRB3/CD85a/PirB  白細胞免疫球樣受體-B抗體 規(guī)格: 0.2ml

    GAPDH  3-磷甘油醛脫(兔來源免疫組化用抗體) 規(guī)格: 0.1ml

     


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