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    產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

    首頁>產(chǎn)品中心>PCR相關(guān)試劑>核酸純化>2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    簡要描述:

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )公司正在出售的產(chǎn)品:人膽囊上皮細(xì)胞永生化 TRIM44蛋白封閉多肽 禽輪狀病毒PCR檢測試劑盒 大鼠顆粒B(Gzms-B)ELISA檢測試劑盒 丙酮(PA)含量活性比色法檢測試劑盒 蔥鏈格孢(蔥紫斑病菌) EFHC1蛋白抗體

    更新時(shí)間:2024-01-12

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    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    貨號

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    1ml×5

    A-Hc2082

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    1ml*50

    A-Hc2082

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

    1ml×100

    A-Hc2082

    QQ截圖20240110094643.jpg


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    PCR基本步驟及注意事項(xiàng)?

    一、實(shí)驗(yàn)原理

    PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列,實(shí)現(xiàn)對特定位置的擴(kuò)增;PCR Buffer提供一個(gè)反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過程即可實(shí)現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴(kuò)增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

    在擴(kuò)增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴(kuò)增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應(yīng)。平臺期(Plateau)會使原先由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴(kuò)增,達(dá)到較高水平。因此,應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達(dá)平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

    二、主要的成分

    1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時(shí)間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預(yù)變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

    注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原因就在于實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

    2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴(kuò)增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

    PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題有哪些?

    沒有ct值

    檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

    1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));

    2、PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸時(shí)采集信號,另外熒光采集是否選中;

    3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

    4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準(zhǔn)備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復(fù)凍融;

    5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴(kuò)增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴(kuò)增)。

    ct值過晚

    在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準(zhǔn)確。

    因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和目的進(jìn)行。

    1、擴(kuò)增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計(jì)不合理, 需要重新設(shè)計(jì);

    2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當(dāng)降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長10s);

    3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

    4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計(jì)超過500bp;

    5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測或?qū)⒛0暹M(jìn)行稀釋。

    公司正在出售的產(chǎn)品:

    人乳頭瘤病毒16 染料法熒光定量PCR試劑盒

    蛋白酪氨磷1BELISA試劑盒 PTP1B免費(fèi)代測試劑

    伊派病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    北豆根染料法PCR鑒定試劑盒

    補(bǔ)體應(yīng)答基因32ELISA試劑盒 RGC32免費(fèi)代測試劑

    甲型流感病毒107亞型PCR檢測試劑盒說明書

    玉米S/MS RT-PCR檢測試劑盒

    Cornulin蛋白ELISA試劑盒

    綿羊皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

    阪崎腸桿菌PCR試劑盒

    層粘連蛋白α2ELISA試劑盒

    綿羊皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

    輪狀病毒E群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

    大腸癌專一抗原4ELISA試劑盒

    桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    禽致病性大腸桿菌O1血清型染料法熒光定量PCR試劑盒

    轉(zhuǎn)運(yùn)體樣蛋白4ELISA試劑盒

    豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測試劑盒

    青蟹雙順反子病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

    蛋白聚糖3ELISA試劑盒

    牛腺病毒(4-8型)通用染料法熒光定量PCR 試劑盒

    鹿特定基因序列PCR檢測試劑盒

    登革熱ELISA試劑盒

    羅斯肉瘤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

    流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒

    凋亡抑制因子5ELISA試劑盒

    耐藥銅綠假單胞菌核檢測試劑盒

    禽偏肺病毒(aMPVPCR檢測試劑盒(熒光-PCR)

    多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移4ELISA試劑盒

    綿羊莫拉菌PCR檢測試劑盒

    口蹄疫病毒A血清型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

    人谷氨[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)抗體檢測試劑盒elisa

    牛丘疹性口炎病毒PCR檢測試劑盒

    羌蟲病立克次氏體PCR檢測試劑盒

    人缺血修飾白蛋白(IMA)試劑盒ELISA

    麥芽染料法PCR鑒定試劑盒

    牛肺線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    人多功能蛋白聚糖(versican)ELISA試劑盒

    卵形瘧原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

    伊氏李斯特菌探針法熒光定量PCR試劑盒

    S100蛋白(S-100)試劑盒 ELISA

    2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )短螺旋體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

    志賀菌ipaH 基因(bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒

    人苯丙氨(LPA) 試劑盒 ELISA

    牛細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒

     


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